小鼠泛素结合酶ube2w的抗体制备及组织表达谱分析

泛素结合酶(e2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用。ube2w是一种新发现的e2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道。生物信息学分析ube2w鼠源氨基酸序列,发现ube2w具有典型的ubc结构域并在多种物种高度保守。通过构建ube2w原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了gst-ube2w融合蛋白。以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗ube2w多抗血清,并利用制备的ube2w抗原柱亲和纯化ube2w多抗。为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-ube2w融合蛋白,分别用myc单抗和ube2w多抗进行westernblotting分析,结果表明获得了特异性的ube2w抗体。利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏、肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了ube2w的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高。