hiv-1gp41的酵母表面展示及表达优化

以his标签检测蛋白的表达,利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将hiv-1gp41片段锚定在酵母表面,并检测到gp41的活性。以pmd18t-gp41为模板,通过pcr技术克隆了gp41基因,将gp41基因通过双酶切连接到载体picas-his上,构建了gp41酵母表面展示载体,并将其转化至酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)mt8-1中。重组菌经培养,利用免疫荧光染色方法进行染色,显微镜观察发现重组酵母细胞表面有绿色荧光,流式细胞仪结果进一步证实gp41正确折叠展示于酵母细胞表面。采用不同浓度的葡萄糖培养基进行表达优化。当葡萄糖浓度为1%时,82.46%的酵母细胞表达了gp41抗原;随着葡萄糖浓度升高,蛋白表达受到抑制。