猪流感病毒抗原表位基因表达载体构建与免疫原性分析

根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(heamuglutinine,ha)的核苷酸序列,设计、筛选ha蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以柔性连接串联成模拟蛋白,核苷酸约为300bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原核表达载体pet30a(+)中,转染宿主菌诱导表达,结果获得分子量为20kd的表达蛋白,该蛋白可与抗his-tag抗体、抗猪流感病毒h1n1、h3n2亚型高免血清发生免疫学反应。纯化后免疫小鼠,elisa及血凝抑制(heamuglutinineinhibitor,hi)试验检测,小鼠产生针对多肽抗原的血清抗体,同时还可检测到h1n1、h3n2亚型siv血凝抗体。流氏细胞仪检测免疫组外周血淋巴细胞高于对照组,说明该模拟蛋白具有与h1n1、h3n2亚型猪流感病毒相似的免疫原性及反应原性,为h1n1、h3n2血清亚型猪流感病毒疫苗研制提供了新手段。