prongf在大肠杆菌中的表达、纯化和复性

将含有前导肽的人神经生长因子基因(prongf)克隆在原核表达载体pet15b中,转化大肠杆菌bl21(de3)plyss,经iptg诱导实现了目标融合蛋白的高效表达。sds-page分析表明表达蛋白占全菌总蛋白的20%左右,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。用6mol/l的盐酸胍溶解包涵体后,通过ni2+-nta柱纯化,获得纯化的目标融合蛋白,电泳谱带扫描分析表明蛋白纯度可达90%以上。westernblotting检测显示,表达产物有较强的免疫学活性。经肠激酶作用后得到prongf非融合蛋白,分子量为27kd,100ml表达菌液可获得13.1mgprongf蛋白。用透析复性的方法将目的蛋白重折叠,复性率为18%,在重折叠过程中前导肽发挥了一定的积极作用。用pc12细胞进行生物活性鉴定,结果显示复性后的prongf蛋白具有良好的生物活性。