仙客来愈伤组织的超低温保存

为了避免连续继代造成仙客来愈伤组织的变异,对仙客来愈伤组织进行了超低温冷冻保存研究。以继代后处于对数生长期的愈伤组织为实验材料,首先在含有不同蔗糖浓度的培养基上预培养不同时间,转至不同的冰冻保护剂中直接液氮冷冻或-20oc预冷冻2h,然后液氮超冷冻保存,37oc水浴迅速解冻,并用相应蔗糖浓度的液体培养基洗涤,以中性红染色测定细胞的存活率,spss13.0软件进行统计学分析。结果表明:预培养基中蔗糖浓度、预培养时间、降温方式、冷冻保护剂等对解冻后材料相对存活率存在不同程度的影响,筛选出4%蔗糖浓度预培养3d、9号保护剂、0oc停留30min后直接冷冻为超低温保存的最佳方案,通过简单的方法获得了较好的愈伤组织保存效果。