新疆黄精凝集素基因的克隆、序列分析和表达

用百合科黄精属植物凝集素基因的保守序列为引物,从新疆黄精的叶中克隆出黄精凝集素的全长cdna。序列分析表明,克隆获得的新疆黄精凝集素(polygonatumroseumagglutinin,pra)基因完整的orf片段大小为550bp,编码1条长159个氨基酸肽链,没有内含子,其中n端的28个氨基酸是信号肽。对新疆黄精凝集素cdna序列同源性的分析比较发现,黄精属植物凝集素基因之间有很高的同源性(92%)。氨基酸序列比对和swiss-model同源模建分析表明,pra由12个b-折叠片组成的b-桶结构,具有与单子叶植物甘露糖结合凝集素相似的空间结构。重组质粒pgex-4t-1-pra和pmal-p2x-pra,分别转化e.colibl21进行原核表达,新疆黄精凝集素能够以可溶性融合蛋白形式表达,分子量约为14kd。构建真核表达载体pcdna3-pra,免疫小鼠后获得了抗血清。免疫印迹结果显示为单一的条带,证明该抗血清具有针对pra抗原的专一性。新疆黄精凝集素基因的克隆、原核和真核的表达以及抗血清的制备,为进一步研究凝集素蛋白的性质和功能,并为植物抗病虫基因工程研究提供有用的实验材料。