鸡氨肽酶h在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析

氨肽酶h(aminopeptidaseh,aph))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶,但因为天然材料中含量很低,基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能。从鸡肝组织克隆了aph的全基因序列,并把该序列亚克隆到载体pet22b(+)上,然后转化大肠杆菌rosetta(de3),构建了aph的表达菌株。该菌株经iptg诱导,在sds-page上明显出现一条与天然aph理论分子量一致的新增蛋白带,该条带的浓度随着表达时间的延长逐渐加深;6h基本达到平衡,此时重组蛋白占总蛋白的16.7%,表达水平高达94.7mg/l。对表达产物进行了活性检测、纯化和酶学性质分析,发现重组蛋白在亚基构成,热稳定性,最适ph等方面与天然aph基本相同,据此可以确认表达产物确实是aph,发酵液总活力达到1636u/l。这些结果为aph的催化机理及其在生物体内的功能的阐明奠定了重要的物质基础。