肠杆菌膦酸酯代谢途径中phnf基因的研究

大肠杆菌的phn操纵子与膦酸酯(pn)的利用密切相关。实验利用pcr扩增、ta克隆等方法．获得了大肠杆菌phn操纵子中phne、phnf和phng基因的亚克隆，并进行了序列测定。通过p1噬菌体转导，构建了phnf的tnphoa’-9转座子插入突变体jw19，该突变仅对大肠杆菌的aepn同化有微弱的影响，而利用phne和phng序列与染色体重组构建的phnf全缺失突变株jw67，则几乎不能在．aepn培养基上生长。通过phnf基因的诱导高表达，用亲和柱层析分离纯化了phnf。蛋白，达到电泳纯。并且用凝胶延滞的方法观察到，phnf蛋白与加phn操纵子dna片段相互作用后，可使凝胶图谱类型发生改变。