蜘蛛大壶状腺丝蛋白基因的克隆和原核表达

以悦目金蛛（argiopeamoena）丝腺smartracecdna文库为模板进行rt-pcr，克隆了1条大壶状腺丝蛋白（majorampullatespidroin,masp）基因cdna序列。该条cdna序列编码的氨基酸序列可区分为两部分：(1)富含丙氨酸的片段和富含甘氨酸的片段相间排列构成的重复氨基酸序列区，并且富含甘氨酸的片段中有脯氨酸分布；（2）约100个氨基酸残基组成的c末端非重复氨基酸序列区。把masp基因cdna序列亚克隆到质粒pet28b(+)中，构建原核表达质粒pet28b(+)-masp，表达质粒转化大肠杆菌bl21(de3)，用iptg诱导表达。sds-page、氨基酸组成测定和n末端氨基酸序列测定的结果表明，表达产物为重组masp，表达量约为40mg/l。还对c末端非重复氨基酸序列对重组masp在水媒介中溶解性的影响进行了探讨。