日本血吸虫信号转导蛋白sjwnt_4基因的克隆、表达及功能分析

由wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的wnt信号通路，是细胞发育和生长调节的一个关键途径，对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中，wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子，在胚胎发育中起着关键作用。利用race技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个wnt家族基因，序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp，编码436个氨基酸，理论分子量49.6kd。同源性分析结果表明，该基因的氨基酸序列具有典型wnt家族蛋白特征，与日本三角涡虫、人wnt4的氨基酸序列相似性分别达43％、37％，推测为血吸虫的wnt4基因，命名为sjwnt4（genbank登陆号dq643829）。实时定量pcr分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达，其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段，44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pgex_4t_2_sjwnt4，应用大肠杆菌系统进行了表达，表达蛋白以包涵体形式存在，western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。sjwnt4基因及其表达产物的获得，为探索wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。