hepcidin的基因克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

根据已知hepcidin氨基酸序列，参照毕赤氏巴斯德酵母(pichiapastoris)密码子偏好性，设计合成了hepcidin目的基因。所合成的hepcidin基因全长96bp，其5′端引入kex2基因产物（kex2）的特异性识别位点序列，以保证表达产物具有天然n端。通过基因重组的方法将hepcidin基因克隆到ppiczαa载体中，构建了分泌型重组酵母表达载体ppiczαa_hepc，经电转至毕赤酵母gs115中表达。使用浓度高达1500μg/ml的zeocin筛选得到高拷贝插入gs115菌株，经摇瓶发酵和甲醇诱导，上清液有明显的hepcidin表达，表达量达到100mg/l。初步抗菌特性研究表明,该表达产物对枯草芽孢杆菌有明显的抑菌作用，而对大肠杆菌抑菌效果不明显。