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生物工程学报 2007
人工转录因子促进外源基因在cho细胞中的高效表达, PP. 21-26 Keywords: 人工转录因子,cho细胞,egfp,t-pa,高效表达 Abstract: 以酵母转录因子gal4中1-147位氨基酸序列为构建人工转录因子的dna结合结构域,单纯疱疹病毒转录激活子vp16中12肽(dalddfdldmlg)的4个串联重复作为人工转录因子的功能结构域,用sv40的核定位序列(nls)将两部分连接起来,构建了人工转录因子gvp4并将其克隆进入表达载体pcdna3.1/hygro(+)中。将不同长度的人工转录因子结合序列构建在外源基因表达载体pcdna3.1(+)启动子cmv的上游,分别连接外源基因egfp和tpa。用表达人工转录因子和外源基因的载体共转染cho细胞,egfp和tpa在含不同数量人工转录因子结合位点表达载体pcdna3.1(+)转染的cho细胞中的表达水平呈现不同程度的提高。其中,以引入10个人工转录因子结合位点的表达载体的效果最明显,egfp和t-pa的表达效率均提高2~3倍。结果表明,人工转录因子能有效地促进外源基因在哺乳动物细胞中的表达。
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