重组maxadilan的制备与鉴定

为利用基因工程技术获得重组maxadilan(rmmax),根据maxadilan的氨基酸序列,设计并人工合成了在原核表达的基因。克隆到表达载体pkyb,重组质粒pkyb-max转化表达宿主菌escherichiacolistrainer2566,构建表达工程菌。用诱导剂iptg诱导由目的多肽、内含肽和几丁质结合域(chitinbindingdomain,cbd)组成的“三元”融合蛋白表达;用几丁质珠亲和层析纯化了裂解液中的融合蛋白,用b-巯基乙醇切割融合蛋白,获得目的蛋白。所得的多肽经激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符,生物活性分析表明,重组maxadilan有显著的提升血糖的作用。