巨大芽孢杆菌b-淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析

从巨大芽孢杆菌(bacillusmegaterium)的全基因组dna文库中筛选出一个b-淀粉酶基因amyg,分析测定了其核苷酸序列并进行了诱导表达;其中amyg编码的蛋白有545个氨基酸、分子量为60.194kd,与已报道的巨大芽孢杆菌dsm319的b-淀粉酶序列有着94.5%的同源性。经氨基酸序列比较分析发现,amyg从n末端到c末端依次由信号肽域、糖基水解酶催化功能域和淀粉结合域3个功能域组成。其中催化功能域里含有第14家族糖基水解酶常见的几个高度保守的酶催化活性区。经多步纯化,重组酶的比活共提高了7.4倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经sds-page电泳测定,酶amyg的分子量为57kd。该酶的最适反应温度为60oc,最适反应ph为7.0;在温度不超过60oc时,酶活较稳定;amyg能迅速降解淀粉生成麦芽糖,属于外切b-糖苷酶。