表达猪瘟病毒e2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析

为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒e2基因的重组腺病毒radv-e2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和westernblotting检测外源基因表达,然后用radv-e2免疫家兔,免疫后6w用猪瘟兔化弱毒疫苗株(c株)进行攻击,攻毒后3d取其脾脏,用实时荧光定量rt-pcr检测c株病毒rna。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010tcid50/ml;外源基因可在其中得到稳定表达;radv-e2接种兔免疫后2w产生猪瘟特异性抗体,免疫后5w抗体达到峰值,攻毒后radv-e2接种兔和c株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到c株病毒rna,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量c株病毒rna,其含量达到了103拷贝/ml以上。由此表明,radv-e2可望开发为猪瘟候选疫苗。