共表达prrsvgp5蛋白和csfve2蛋白的“自杀性”dna疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

为了获得新型双价“自杀性”dna疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,prrsv)gp5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,csfv)e2基因的甲病毒复制子载体疫苗psfv1cs-e2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的gp5基因中插入了泛dr表位(padre),在csfve2基因后融合伪狂犬病病毒(prv)ul49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,prrsvgp5和csfve2基因在瞬时转染的293t细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体psfv1cs分别免疫balb/c小鼠,用间接elisa方法检测血清抗体水平,通过基于csfe/wst-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子elisa评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除psfv1cs组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对gp5和e2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经csfv和prrsv刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经csfv和prrsv刺激后可分泌较高水平的ifn-g和il-4;引入ul49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。结果表明,这些共表达gp5和e2蛋白的自杀性dna疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,prvul49可以增强其细胞免疫应答。