玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化

玉米zeamaysl.、小麦triticumaestivuml.、水稻oryzasatival.是三大重要粮食作物，对其原生质体制备条件的优化具有重要意义。以玉米(综3)、小麦(中国春)、水稻(日本晴)10日龄幼苗为材料，研究了叶肉细胞原生质体分离过程中的酶浓度、酶解时间和离心力大小等因素对产量和活力的影响。结果表明：酶浓度和酶解时间对原生质体产量影响显著，随着酶解液浓度和酶解时间的提高，原生质体产量增加，但细胞碎片同时增多。水稻经真空处理后，原生质体产量大幅度提高。通过正交实验设计得出如下结果：玉米叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为：纤维素酶1.5％，离析酶0.5％，50r/min酶解7h，100×g离心2min收集，原生质体产量为7×106/gfw；小麦叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为：纤维素酶1.5％，离析酶0.5％，50r/min酶解5h，100×g离心2min收集，原生质体产量为6×106/gfw；水稻叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为：纤维素酶2.0％，离析酶0.7％，50r/min酶解7h，1000×g离心2min收集，得到的原生质体产量为6×106/gfw。通过二乙酸荧光素染色发现原生质体活力均在90％以上。用peg-ca2+介导法将含有绿色荧光蛋白的质粒转化入原生质体，转化率可达50％~80％。