制备可溶性肿瘤坏死因子受体ii－脂联素球部融合蛋白的两种细胞培养工艺比较

利用7.5l生物反应器篮式贴壁培养和全悬浮批式培养cho工程细胞株表达可溶性肿瘤坏死因子受体ii-脂联素球部(stnfrii-gad)融合蛋白，比较这两种培养方法的产率，以便优化高效表达stnfrii-gad融合蛋白的制备工艺。篮式贴壁培养首先小规模培养cho工程细胞株，待细胞增殖到一定密度后以3×105~4×105cells/ml密度接种生物反应器贴壁培养3d，调换成不含血清的lk021培养基继续培养4d。而全悬浮无血清批式培养则以3×105~4×105cells/ml密度的cho工程细胞株接种于生物反应器，连续培养7d。培养过程实时监测培养条件，维持ph和do的稳定。分别收集细胞上清，离心去细胞后用pellicon切相流超滤系统对蛋白进行浓缩，并通过deae离子交换柱进行纯化。结果显示，篮式贴壁培养和全悬浮批式培养均成功表达了stnfrii-gad融合蛋白，产量分别为8.0mg/l和7.5mg/l、纯度分别为95％和98％，从而为stnfrii-gad融合蛋白的中试工艺研究提供了一定的基础。