可降解tce的甲烷氧化菌16srdna与pmocab基因簇序列分析

甲烷氧化菌可高效催化甲烷和多种氯代烃降解，开展甲烷单加氧酶的基因簇序列分析研究有助于深入了解催化机理，并提升其在污染物生物降解领域中的应用价值。以甲烷为唯一碳源富集分离甲烷氧化菌，取5种氯代烃作为共代谢基质考察其降解情况，利用mege5.05软件构建基于16srdna的系统发育树对所选菌株进行初步鉴定，用半巢式pcr法分段扩增菌株的颗粒性甲烷单加氧酶(pmmo)基因簇并进行t-a克隆测序，通过expasy计算pmmo三个亚基的理论分子量。筛选到了一株甲基孢囊菌methylocystissp.jtc3，在三氯乙烯(tce)初始浓度为15.64μmol/l条件下，反应5d后降解率可达93.79%。经扩增、测序、拼接得到了3227bp的pmocab基因簇序列，包括771bp的pmoc基因、759bp的pmoa基因、1260bp的pmob基因和2个非编码中间序列，所对应γ、β、α亚基理论分子量分别为29.1kda、28.6kda和45.6kda。通过blast比对发现methylocystissp.jtc3的pmocab基因簇序列与methylocystissp.strainm的pmocab一致性较高，其中pmoa的序列相对保守。jtc3菌株可高效降解tce，对pmocab基因簇序列的详细分析可为pmmo活性中心特征、氯代烃类底物选择性等方面的深入研究提供信息数据基础。