一次性生物反应器悬浮培养hek293细胞生产ad-ifnγ的工艺

腺病毒载体是极具发展前景的基因治疗载体之一，为获得一条新型腺病毒规模化生产工艺，研究采用5l振荡激流式一次性生物反应器悬浮培养hek293细胞来生产重组腺病毒载体。细胞经种子链逐步扩增后，接种至ap10生物反应器，采用cd293无血清培养基流加培养悬浮hek293细胞，细胞密度达约2.0×106个/ml时，以30moi(multiplicityofinfection)感染重组ad-ifnγ(recombinantadenovirus-interferongamma)，48h后收获细胞，3次冻融裂解离心收获上清病毒粗产品。采用壳蛋白免疫法快速测定粗产品滴度。结果表明，采用振荡激流式一次性生物反应器，流加hek293细胞悬浮培养6d，密度可达2.0×106个/ml，ad-ifnγ粗产量达1.49×1013ifu(infectiousunit)，单细胞包装量达3800ifu/cell。采用阴离子交换层析法纯化重组腺病毒，回收率35.9%。建立了利用5l激流式一次性生物反应器悬浮培养hek293细胞生产重组腺病毒载体ad-ifnγ的初步工艺。