乳腺生物反应器表达的重组人抗凝血酶ⅲ的分离纯化

抗凝血酶ⅲ(atⅲ)是人体内最重要的抗凝血物质，利用转基因技术生产重组人抗凝血酶ⅲ(rhatⅲ)受到了越来越多的关注，如何有效地将rhatⅲ从转基因羊奶中分离纯化出来是实现其产业化的关键所在。本研究建立了基于等电点沉淀和肝素亲和层析的纯化工艺，实现了rhatⅲ的高效、快速纯化。先用等电点沉淀法，快速去除了占总蛋白50%左右的酪蛋白；然后用肝素亲和层析纯化rhatⅲ，并系统考察了ph值和温度对rhatⅲ稳定性的影响，以及ph值和操作条件(洗脱梯度、流速和上样量)对rhatⅲ分离效果的影响。在优化的条件下，rhatⅲ纯度达到99%以上，蛋白收率达到90%，活性收率约为50%。所建立的纯化工艺简单、快速，rhatⅲ收率高，为今后工艺放大提供了重要的依据和参考。