反相c18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理

针对少量且复杂蛋白质组样品，开发一种耗时短、操作简便的分离方法。以人的脑海马组织蛋白样品为研究对象，采用反相c18固相萃取小柱，采用不同乙腈浓度对酶切后样品进行梯度洗脱，与反相高效液相色谱法对比分离效果。通过比较不同乙腈梯度洗脱方案所鉴定到的谱图数、非冗余多肽数、蛋白数和各洗脱组分间重复率分析，确定一种样品量少、简单易行、分离效果好的实验方案。虽然反相c18固相萃取小柱法鉴定蛋白总数占高效液相色谱法的85.5%，但其操作简单，耗时少。通过4种不同乙腈浓度方案比较，确定乙腈洗脱浓度优化为5%、15%、20%和90%时，分离30μg人的海马多肽混合物可以得到较优的分离效果。其蛋白鉴定数为反相液相色谱法的67.0%，且重复性良好。该结果证实反相c18固相萃取小柱分离效果比反相高效液相色谱法稍差，但此方法可以分离少量复杂蛋白质组样品。该方法分离样品充分，操作易行，耗时短，是进行蛋白质组学分析中少量样品的一个简便预处理方法。