猪表皮生长因子在植物乳杆菌中的表达及其活性检测

为获得一株高效表达猪表皮生长因子(pegf)的重组植物乳杆菌，并检测其生物活性，从仔猪肠道内容物中分离植物乳杆菌，选择其中生物活性最强的一株(lp-1)为宿主。以商品化乳杆菌表达载体piaβ8为骨架，干酪乳杆菌超强组成型启动子scp、m6前体蛋白信号肽sp、猪表皮生长因子pegf等为元件，构建表达pegf的植物乳杆菌重组表达载体pscpse。用电转化方法(2.0kv，2000ω，25μf，4.0ms)将重组载体pscpse转化入宿主菌lp-1中获得重组植物乳杆菌lp-pscpse。以tricine-sds-page法和pegfelisa特异性检测试剂盒检测目的蛋白的表达；用培养12h的阳性转化子菌体给刚断奶的balb/c小鼠灌胃，2次/天，连续10d，以断奶小鼠的体重、肠绒毛长度和隐窝深度的变化为指标，检测目的蛋白的生物活性。tricine-sds-page检测和小鼠实验结果显示，重组植物乳杆菌的培养上清中出现6kda左右pegf的特异性条带，且表达pegf的重组植物乳杆菌能显著增加(p<0.05)断奶小鼠的体重、肠绒毛高度和肠隐窝深度。以上结果表明，pegf能在植物乳杆菌中成功表达，且具有良好的生物学活性。