蛋白质n端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统

对酵母ｎｍｔ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究，进而构建了复制子为ｐ１５ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐｋｚｍｔ，将其与表达质粒ｐｃｚｍｃα１共转化进大肠杆菌ｂｌ２１（ｄｅ３）ｆ′，进行双质粒表达偶联加工修饰研究，其中ｐｃｚｍｃα１表达底物蛋白小鼠ｃａｍｐ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ｐｋａ-ｍｃα）。ｓｄｓｐａｇｅ及ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，双质粒表达系统中，ｐｋａ-ｍｃα都得到了稳定的高表达，尤其在２３℃低温诱导表达时，表达产物的可溶性部分明显增多；而酵母ｎｍｔ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［３ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示，在大肠杆菌中表达的重组ｐｋａ-ｍｃα被豆蔻酰化修饰。