枯草杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆及表达

以质粒ｐｕｃ１８为载体，从枯草杆菌（ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）ｄｂ１０４基因组中克隆到一个内切葡聚糖酶基因。限制酶切分析表明重组质粒中的插入片段为３.５ｋｂ，其中各含有一个ｅｃｏｒｉ，ｈｉｎｄⅲ和ｐｖｕⅱ位点。该插入片段含有一完整的内切葡聚糖酶基因，其自身启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。当加入ｌａｃｚα基因启动子的诱导物ｉｐｔｇ后，内切葡聚糖酶表达量提高２.８倍。加入０.５％葡萄糖能抑制该基因的表达。该基因在大肠杆菌ｄｈ５αｆ′中表达的内切葡聚糖酶分布为：胞外６７.３％，胞间周质３.９％，胞内２８.８％。ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该插入片段来自供体菌ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓｄｂ１０４。