粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α链（gm-csfrα）的克隆与表达

ｇｍ-ｃｓｆ高亲和力受体至少由两条链组成，低亲和力的α链及无结合力活性的β链。本文采用ｒｔ-ｐｃｒ的方法，从ｇｍ-ｃｓｆ依赖细胞株ｔｆ-１中克隆了全长的ｇｍ-ｃｓｆｒα链ｃｄｎａ（包括信号肽部分），经酶切及全基因测序鉴定，并分别在原核及真核细胞表达系统中表达。在大肠杆菌中ｇｍ-ｃｓｆｒα以ｇｓｔ融合蛋白形式表达，谷胱甘肽ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ｂ亲和层析纯化融合蛋白。ｇｓｔｃｓｆｒαｃ无受体活性，推测主要与缺乏翻译后修饰有关。将全基因克隆入真核表达载体ｐｓｖｌ中，转染ｃｏｓ-７细胞瞬时表达以重建ｇｍ-ｃｓｆ的低亲和力受体，１２５ｉｇｍ-ｃｓｆ平衡结合实验证明转染后的ｃｏｓ-７细胞膜上有受体的表达，ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ显示表达的受体α链分子量略低于ｔｆ-１细胞。胞外区基因（ｃｓｆｒαｂ）克隆入ｐｓｖｌ构建的ｐｓｖｌ／ｃｓｆｒαｂ表达载体，转染ｃｏｓ-７细胞后，ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达细胞上清，有单一的反应带，表达上清有ｇｍ-ｃｓｆ的受体活性。