枯草杆菌碱性蛋白酶ki2基因的序列测定及m222a定点突变

含有枯草杆菌碱性蛋白酶ｋｉ-２基因的１.９ｋｂｄｎａ片段用限制酶切成几个小片段，将这些片段分别插入ｍ１３ｍｐ１８或ｍ１３ｍｐ１９中，用通用测序引物测得全序列。所得全序列与蛋白酶ｅ相比较，在结构基因部分仅有８个碱基不同，由此而导致两个氨基酸的差异。此１.９ｋｂ的片段插入枯草杆菌大肠杆菌穿梭质粒ｐｂｅ-２，得到的重组质粒转化蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌ｄｂ１０４，结果表明枯草杆菌碱性蛋白酶ｋｉ-２基因在ｄｂ１０４中能利用自身的调控元件表达并分泌到胞外。将ｋｉ-２蛋白酶的２２２位甲硫氨酸突变成丙氨酸，突变后的ｋｉ-２蛋白酶具有抗氧化性，但比活性比野生型的约低１倍