链激酶基因的分离和其在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化

从化脓性链球菌的染色体ｄｎａ分离得到的目的基因片段定向插入载体ｐｂｖ２２０中，获得有目的基因插入的重组质粒ｐｂｖｓｋ。双脱氧链终止法手工测序和ｂｅｃｋｍａｎ自动测序仪分析ｒｓｋ基因的全长序列，测序结果表明我们所获得的ｒｓｋ基因与文献报道的基本一致。重组质粒ｐｂｖｓｋ转化受体菌ｅ．ｃｏｌｉｄｈ５α株，温敏诱导后表达一个分子量约４７ｋｄａ的特异蛋白，其表达量为６０％。表达产物以包涵体的形式存在，包涵体经过洗涤、溶解和纯化后，最终纯度达到９５％以上。复性的重组蛋白用体外血块溶解法测定生物活性，结果表明我们所获得的ｒｓｋ蛋白具有较好的溶解血块的活性，其比活性为１.３×１０５ｕ／ｍｇ。