非连续多核苷酸定点突变的方法

以人粒巨噬细胞集落刺激因子（ｈｇｍ-ｃｓｆ）、人α８干扰素（ｈｉｆｎ-α８）和分裂细胞核抗原（ｐｃｎａ）的ｃｄｎａ定点突变为例，建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒ｄｎａ，先用突变引物延伸单链，然后通过ｐｃｒ扩增得到突变双链ｄｎａ。用该方法成功地改造了ｈｇｍ-ｃｓｆ基因５′端３６个核苷酸中的９个位点、ｉｆｎ-α８基因５′端３９个核苷酸中的９个位点和ｐｃｎａ基因ｓｄ顺序两侧６个和７个核苷酸。与经典的含ｕ单链寡核苷酸定点突变方法相比，本方法突变效率高，并省去了对突变克隆杂交筛选的操作