改造的马铃薯y病毒复制酶基因介导高度抗病性

提取马铃薯y病毒中国分离株(pvy—c)的mrna作为模板，随机六聚脱氧核苷酸和寡聚dt为引物合成了单链cdna。通过聚合酶链式反应(pcr)获得了pvy—c的核内含体b(nib)全长cdna克隆。在对其进行全序列分析的基础上，构建了pvy—cnib基因全长．5’端缺失381个碱基和nib反义rna三种不同形式高等植物表达载体。在土壤农杆菌lba4404的介导下，转化烟草生产品种nc89，获得了所有三种表达载体的转基因植株。通过分子生物学检测和抗性分析发现不同形式的nib基因序列的转基因植株对马铃薯y病毒表现不同程度的抗性。其中，以5’端缺失的nlb的基因转化植株表现最好，从总共20个这类转化株系中筛选到4个株系至少在100μg／m1pvy—c接种浓度下，表现完全的抗病效果。从总共39个全长nib基因转化株系中，仅有一个株系，在100μg／mlpvy—c的攻毒接种下具有完全的抗病性。所有33个nib基因反义rna的转化植株中，无一株系表现完全的抗病效果，但是有部分株系能不同程度地延缓或减轻发病程度，并有部分植株在发病后50d左右有恢复健康的趋势。虽然能够在上述3种形式的nib基因序列的转基因植物中检测到相应的rna的转录产物，但是均未能检测到其相应的蛋白表达产物。