蓝细菌orf469的分子克隆和缺失突变工程株的构建

pcr扩增了蓝细菌synechocystissp．pcc6803的orf469(编码469个氨基酸的开放阅读框),进一步以puc118为载体将其克隆到e．coli中，构建了poq2质粒。通过dna体外重组，以红霉素抗性基因取代部分克隆化orf469片段，又构建丁缺失orf469片段(保留部分上游和下游序列)的poq22质粒。用poq22质粒转化synechocystissp．pcc6803野生株细胞，获orf489缺失突变工程株，它在红霉素抗性培养基上生长正常。对缺失突变工程株dna的pcr和southernblot分析证明，synechocystissp．pcc6803的orf469已被删除。色素测定结果揭示synechocystissp．pcc6803中orf469表达产物控制细胞内不依赖光的叶绿素生物合成。