苯丙氨酸脱氨酶cdna在大肠杆菌中的克隆与表达

利用逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)技术从欧芹总rna分离制备了苯丙氨酸脱氨酶(pal)cdna，重组到质粒pbluescript及pet23b中，后者转化大肠杆菌jm109de3获得pal的高效表达。插入片段两端共920bp的测序结果与文献符合率为9978%。工程菌细胞裂解液用sds-page(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析显示在分子量77kda处有一条表达很强的蛋白区带，与pal亚基分子量相符，约占菌体总蛋白的15%。用hplc法检测到苯丙氨酸被pal脱氨的产物肉桂酸，且该pal酶活力特异性好，适于pku治疗之用。