t-pacdna的克隆及其在毕赤酵母中的表达

应用pcr方法，在t-pacdna5′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽，与酵母表达载体ppic9重组，构建表达质粒pstey，利用licl转化法转化酵母菌ys108，在mm和md平板上筛选表型，pcr筛选t-pacdna与酵母染色体整合而形成的阳性克隆，阳性克隆经甲醇诱导表达后，用sds-page证明表达产物的分子量为6kda左右，用酪蛋白板溶圈法测定tpa的活性。mut-s表型菌表达产物活性最高为2500iu/ml,westernblot证实表达产物具有天然t-pa分子的免疫原性。