单链抗体2f3表达条件的优化及其提纯和性质研究

将构建好的单链抗体2f3表达载体ptmf2f3scfv转化到大肠杆菌bl21(de3)。先挑选出表达量高的单克隆,然后让其在37℃进行表达,并将表达时的培养条件进行优化。实验结果表明:最佳诱导条件为开始诱导时的菌体密度od590nm=1.0～1.8,所加异丙基β-d硫代半乳糖苷(iptg)的浓度为0.3～0.5mmol/l,诱导时间7h,优化后目的蛋白表达量占菌体总蛋白的20%,并用发酵罐成功地进行了扩大培养,筛选了洗涤包涵体的最佳条件。采用两步法对包涵体复性进行了研究,用westernblotting及elisa法检测了所表达的单链抗体及其生物活性,并成功制备了含硒单链抗体酶.