利用mrna差别显示技术分离盐胁迫下红树植物白骨壤耐盐相关cdna

从福建龙海红树林自然保护区采集白骨壤的隐胎生果实,在实验室分别置于0‰盐度海水和50‰盐度海水进行沙培。分别取叶片,提取纯化rna。通过锚定引物oligodt12gc反转录和8个10核苷酸随机引物进行pcr扩增,经8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后发现了3个差异dna片段只在高盐培养条件的白骨壤基因组中表达,而在无盐培养条件中没有出现。这3个差异cdna片段分别命名为csrg1(600bp)、csrg2(550bp)、csrg3(480bp)。3个差异cdna片段的rna杂交结果显示,只有csrg1片段存在明显差异高盐中有杂交斑点,无盐中无杂交斑点;而其余2个片段在高盐和无盐条件下都没有杂交斑点出现。从而表明csrg1就是耐盐相关cdna。进一步将csrg1片段克隆,并进行dna序列分析。全序列在genbank中查询后,未发现相关同源片段。耐盐相关cdna片段的获得,将为分离全长耐盐基因,搞清该基因表达调控的机理提供条件.