人前列腺特异膜抗原膜外区基因的克隆表达及抗体的制备

利用rtpcr技术,从前列腺癌组织总rna中扩增人前列腺特异膜抗原(psma)基因编码区序列,克隆至pcdna3.1载体,以此为模板再次pcr扩增出psma膜外区cdna(edpsma),序列测定表明克隆获得的psma及edpsma与基因库所登录的序列相一致。构建原核表达质粒pmalc2xedpsma,经iptg诱导表达的mbpedpsma融合蛋白分子量约120kd,westernblot证实表达产物可特异地与psma单克隆抗体4g5结合。用直链淀粉琼脂糖凝胶(amyloseresin)亲和层析纯化蛋白质可得到电泳均一的融合蛋白,免疫balbc小鼠制备多抗,获得效价为1∶12800的多克隆抗体,该抗体可用于前列腺癌组织标本psma表达的检测