特异切割苹果锈果类病毒的核酶基因的克隆和转录物的体外活性测定

根据锤头型核酶的作用模式,设计、合成和克隆了特异切割苹果锈果类病毒assvd正链(194-196位点)或负链(89-91位点)rna的2个短臂锤头型核酶基因:42nt的rzassvd(+)和40nt的rzassvd(-)。经转录获得核酶转录物和32p标记的assvd正、负链转录物。将核酶与assvd混合,50℃或37℃保温3～4h,进行8%page(含8moll尿素)和放射自显影分析。体外切割检测表明:2个核酶均具有特异切割活性,其中rzassvd(-)对assvd负链的切割活性较高,对assvd正链不起作用。rzassvd(+)对assvd正链的切割活性较弱,对assvd负链亦不起作用。在此基础上,构建得到双价核酶基因pgemrzassvd(±)。