重组人卵透明带zp3蛋白在毕赤酵母中的表达

利用p.pastoris表达人卵透明带zp3蛋白。设计特定引物从全长hzp3cdna上扩增含跨膜区序列的人卵透明带zp3基因片段，并在n末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列；扩增片段插入表达载体ppic9k中；线性化后的重组质粒转入p.pastoris中，用高浓度g418筛选高拷贝菌株，然后甲醇诱导目的蛋白表达。用sds-page和westernblot分析表达产物。结果发现p.pastoris表达的人zp3蛋白可以分泌到培养液中，并且可溶性好。纯化前后的重组人zp3蛋白均能与兔抗猪zp3蛋白抗体发生交叉反应，证实表达的目的蛋白具有反应原性。