野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中一个与eps合成有关的新基因的鉴定

用转座子tn5gusa5对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(xanthomonascampestrispv.campestris,简称xcc)野生型菌株8004进行诱变,分离到一批胞外多糖(eps)合成减少的突变体。采用tail-pcr(thermalasymmetricinterlacedpcr)分析突变体的tn5gusa5插入位点,发现其中一株编号为151d09的突变体的插入位点位于xcc8004菌株的基因组编号为xc3695的orf内,该orf功能尚未见报道。序列分析表明,该orf演绎的编码产物与serratiamarcescens的kdtx基因和klebsiellapneumoniae的waae基因演绎的编码产物分别具有52%和50%的相似性,并具有第2家族糖基转移酶的功能域,因此暂将该orf命名为waxe基因。用同源双交换方法构建了waxe基因的缺失突变体,并采用pcr和southern杂交的方法对突变体进行了验证。waxe基因缺失突变体在营养丰富培养基的生长繁殖不受影响，但其eps产量与野生型菌株8004相比,降低35%左右,并且一段pcr合成的包含waxe基因的dna片段能反式互补waxe基因缺失突变体,恢复缺失突变体的eps产量,表明xccwaxe基因与eps的生物合成有关。