重组人核苷二磷酸激酶a的理化性质

对重组人核苷二磷酸激酶a（rhndpk-a）进行纯化，并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。ndpk-a工程菌发酵后的菌体高压匀浆，然后微孔过滤、超滤浓缩，所得样品经deae阴离子交换、cibacronblue亲和层析、分子筛层析三步纯化后，以sds-page和rp-hplc分析纯化产物的纯度，rp-hplc测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量（mw）；edman降解法测定n末端序列；多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明，rhndpk-a纯化产物的sds-page纯度为97.3%，rp-hplc纯度为99.2%；比活性为（900±100）u/mg；单体相对分子质量为17017，与ndpka分子量理论值相差132。测序结果表明，rhndpk-an末端缺失met残基，其理论分子量为17017，与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明，rhndpk-a在溶液中形成六聚体，表观分子量为102kd。上述结果说明，ndpk-a重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质，这为ndpk-a新药开发和机理研究打下了良好基础。