来源于escherichiacoli的高比活植酸酶基因的高效表达

高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于escherichiacoli的高比活植酸酶基因appa，按照毕赤酵母（pichiapastoris）密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appa-m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体ppic9上的α-因子信号肽编码序列3′端，通过电击转化得到重组转化子。对重组毕赤酵母的southernblotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中，并确定了整合基因的拷贝数。northernblotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录。sds-page分析和表达产物的研究表明，植酸酶得到了高效分泌表达，在5l发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到2.5mg/ml发酵液,酶活性(发酵效价)达到7.5×106iu/ml发酵液以上,大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。