大肠杆菌ptsg基因敲除及其缺陷株生长特性研究

在大肠杆菌磷酸转移酶系统中，葡萄糖主要由ptsg基因编码的酶ⅱcbglc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsg基因缺陷株，有望降低葡萄糖的摄取速率，减少乙酸累积，促进菌体生长。运用pcr技术，扩增出两翼与ptsg基因上下游序列同源，中间为氯霉素抗性基因的dna片段。经电转化，将外源dna片段分别转入escherichiacolidh5α、jm109中。在red重组酶的作用下，外源dna片段与染色体上同源区域重组，将基因ptsg敲除，构建ptsg基因缺陷株dh5αp、jm109p。在lb培养基中，ptsg基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的lb培养基中，dh5αp、jm109p的最高菌密度分别是对照菌株dh5α、jm109的3.47倍和4.25倍，ptsg基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子（tnf）在dh5αp、jm109p中的表达量分别占全菌蛋白的24.3%、20.8%，a600分别为8.28、7.62，tnf在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明，大肠杆菌ptsg基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力，在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。