人端粒结合蛋白trf1的克隆、表达和抗体制备

利用rt-pcr技术，从hela细胞的cdna文库中扩增到人端粒结合蛋白1(htrf1)基因编码区序列，克隆至pucm-t载体，测序正确后，构建带his6-tag原核表达载体pet-28c-trf1，经iptg诱导表达的his6-trf1融合蛋白分子量约为65kd，western-blot证实表达产物可特异地与trf1抗体sc-6165结合。用ni2＋nta胶亲和层析纯化可得到电泳均一的融合蛋白，免疫新西兰纯种大白兔，获得特异性好的多克隆抗体，该抗体可用于免疫荧光染色和western-blot方法检测哺乳动物细胞内源性的trf1分子。