用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除

绿色荧光蛋白(gfp)可直接进行活体观察，它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消除。为此，构建了植物表达载体pgng，将绿色荧光蛋白基因(gfp)和卡那霉素抗性基因表达盒(nosp-nptll-nost)一起克隆在两个同向的lox位点间，在第一个lox位点上游置有camv35s启动子以驱动gfp表达，第二个lox位点下游置有不含启动子的大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶(gus)基因。首先在含卡那霉素(kan)的培养基上筛选出转pgng的烟草，借助绿色荧光可容易地检出表达gfp的转化体。然后用另一转化载体pcambia1300cre二次转化表达gfp的转基因植物，利用另一选择标记基因潮霉素抗性基因(hpt)进行筛选，在获得的再生植株中，cre重组酶的表达消除了转化体中两lox位点间的gfp和nptll。实验结果表明可借助gfp荧光的消失，快速选出nptii被消除的二次转化体，同时gus(作为目的蛋白)在camv35s启动子驱动下获得表达。最后利用后代的分离将hpt和cre除去。