sox4单克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞表达分析中的应用

应用分子生物学技术,构建了含sox4编码序列的原核表达载体,在大肠杆菌dh5a中获得了gst-sox4融合蛋白的可溶性表达。应用谷胱甘肽-sepharose4b对重组蛋白进行了纯化,利用纯化的融合蛋白免疫小鼠,制备了可特异性识别sox4的单克隆抗体。通过间接elisa法鉴定了抗体的效价为1×10-5,westernblotting分析证实了抗体的特异性。结果显示,该抗体可识别细胞内外源性过表达及内源性的sox4蛋白。在培养细胞系、小鼠不同组织中,sox4蛋白的表达存在显著的差异。本研究制备的sox4单克隆抗体具有良好的特异性,为进一步研究sox4在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。