凝胶过滤与镍柱亲和纯化金葡菌a-溶血素重组蛋白的生物学特性比较

以在宿主菌株bl21(de3)中成功表达的重组金黄色葡萄球菌a-溶血素蛋白为研究对象,分析比较通过凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)和镍柱亲和层析纯化试剂盒(ni-ntaspincolumns)纯化所得到的重组蛋白的蛋白含量和生物特性方面的差异。sds-page分析检测纯化产物,bradford法测定蛋白含量,兔红细胞测定半数溶血效价。结果显示这2种方法得到的纯化产物在53kd处均呈现单一清晰带,达电泳级纯度。与此同时,凝胶过滤对目的蛋白的纯化率为14.04%,蛋白含量为0.337mg/ml,溶血活性为1519hu/mg;镍柱亲和层析的纯化率为17.5%,蛋白含量为0.35mg/ml,溶血活性为1463hu/mg。由此可见,凝胶过滤得到的纯化产物在蛋白含量和蛋白活性方面丝毫不亚于镍柱亲和层析纯化试剂盒。