人溶酶体酸性b-葡萄糖脑苷脂酶基因的克隆及其在cos7细胞中的表达

从人胎盘组织提取总rna,采用rt-pcr扩增人溶酶体酸性b-葡萄糖脑苷脂酶(lysosomalacidb-glucosidase,glccerase)基因编码区的全部序列,并克隆到pmd-19t载体上,构建克隆载体pmd-glccerase。经测序验证后,将glccerase亚克隆至表达载体pegfp-c1上,构建了人glccerase绿色荧光蛋白真核表达载体pegfp-glccerase。采用脂质体法将其瞬时转染至cos7细胞系后,在细胞中检测到了glccerase基因,并在细胞裂解产物中检测到了glccerase生物活性的表达。glccerase基因的克隆及其表达,为进一步了解glccerase基因的功能以及利用转基因动物乳腺生物反应器高效生产glccerase奠定了基础。