海栖热袍杆菌来源的极耐热碱性果胶裂解酶的表达、纯化及定性

将来源于极端嗜热菌属海栖热袍杆菌thermotogamaritimamsb8的编码碱性果胶裂解酶的结构基因pela与新型热激质粒phsh连接,得到重组质粒phsh-pela,运用mrna二级结构预测软件对phsh-pela的翻译起始区的二级结构进行优化,得到了具有最佳mrna二级结构及自由能的质粒phsh-pelc。将重组质粒phsh-pelc转入大肠杆菌jm109(de3)进行表达,得到了一种极耐热性碱性果胶裂解酶(pelc)。对重组酶的酶学性质研究发现,该酶的最适反应温度为90oc,最适反应ph为8.5,在ph8.2~9.8之间酶活力稳定,95oc酶活半衰期为2h,并且该酶依赖ca2+作为活性离子。在工业生产常用温度60oc下,该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。以多聚半乳糖醛酸(pga)为底物时,其动力学参数km值为0.11mmol/l,vmax值为327u/mg。sds-page结果显示该重组酶的分子量为43kd,与理论值相符。基于热激载体phsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。