海刺参i型溶菌酶基因的重组表达及抑菌谱分析

将本实验室已分离到的海刺参(stichopusjaponicus)i型溶菌酶的基因(genbankaccessionno.ef036468)亚克隆进原核表达载体pet32a(+)中,构建重组质粒pet32a(+)-sjlys,转化至大肠杆菌bl21(de3)plyss。阳性克隆子经诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了酶活力为19.2u/mg的重组sjlys(rsjlys),并对rsjlys进行了抑菌谱测定。结果表明,rsjlys对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用,尤其对常见的海洋致病菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有很强的抑菌活性。更为显著的结果是,rsjlys经100oc、40min加热处理后,失活的rsjlys对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑菌能力高于rsjlys的9%~25%。上述结果表明,海刺参溶菌酶是一种具有糖苷酶活性和非酶抑菌活性的特殊的i型溶菌酶,且具有很广的抑菌活性,在海刺参机体先天免疫系统中是一个重要的效应分子。