斑马鱼卵母细胞的体外成熟及成熟卵的受精发育

采用体外培养的方法，研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。ⅳ时相初级卵母细胞在o．5μg／m117a－羟基孕酮的em－199培养液中，80％氧气，25℃的体外培养条件下，在40min内，胚泡(gv)逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘l／2处移到动物极边缘，进八v时相卵母细胞。30min后胚泡破裂(gvbd)，胚泡破裂率为59％。此种卵母细胞继续培养2h才完全成熟。成熟卵不能从滤泡膜中自然排出。冷开水中剥离其外边的滤泡膜后加入具有受精能力的精子，即能使成熟卵受精，受精膜举起，胚盘在动物极形成。其后受精卵的分裂、发育等与自然成熟受精卵相同。以发育至囊胚为受精标准，这种体外成熟卵受精率为78％。这是斑马鱼卵母细胞体外培养成熟的首例报道。鱼类卵母细胞体外成熟技术的建立，为外源基因卵母细胞胚泡内转移奠定了基础。